Medios de Cultivo Bacterianos

Investigando sobre los medios de cultivo encontre unas paginas que te describen y te clasifican los medios de cultivo de una manera sencilla y corta.
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Medios de cultivo

Clasificacion de los medios de cultivo

Administración de Fármacos Oftálmicos

La farmacoterapia de la enfermedad de los ojos generalmente requiere altas concentraciones de medicamentos en los tejidos oculares. El tratamiento de la superficie ocular infecciosa y de inflamaciones, requiere una administración eficaz de fármacos para los párpados, conjuntiva o cornea. Al contrario el tratamiento de la uveítis, glaucoma, o retinitis envuelve medicamentos terapéuticos a niveles apropiados  que se profundicen en el globo ocular.

Administración Topica.

Los anestésicos de aplicación tópica incluso se utilizan como anestésico primario para la cirugía de cataratas contemporánea. La principal fuente de pérdida de fármaco en la administración tópica es la difusión en la sangre circulante. Difusión de la sangre se lleva a cabo a través de vasos sanguíneos de la conjuntiva, espisclera,  vasos intraoculares, y vasos de la mucosa nasal y orofaringe después del drenaje a través del sistema nasolagrimal.

Soluciones y suspensiones.

Soluciones o suspensiones son usualmente preferidas sobre unguentos, porque son una forma mas sencilla de aplicarlo, interfiere menos con la visión y tiene menos complicaciones. Las desventajas de aplicar soluciones topicas incluye un corto tiempo de contacto ocular, administración imprecisa e inconsistente del medicamento y la posibiliad de lastimarse con el puntero del gotero.

Muchas de los goteros oculares consisten de dos partes, puntero del gotero y botella de solución o suspensión. Porque es una desventaja administrar pequeñas cantidades de medicamento para minimizar sistemáticamente la absorción de soluciones y suspensiones tópicas, algunos fabricantes han intentado reducir el volumen de las gotas oculares modificando o rediseñando las puntas del gotero. Tradicionalmente entran en un tamaño de 50 a 70 mcl. La típica cantidad ahora administrados por medicamento comercial del glaucoma están en un rango de 25 a 56 mcl. 

La refrigeración de los fármacos permitirán que éstos duren mucho más.  Hay casos de diferencia en irritación ocular causada por goteros oculares refrigerados o guardados en una habitación con cierta temperatura. La fecha de expiración del medicamento debe de ser respetada. El uso de viejos medicamentos puede incrementar el riesgo de toxicidad o de una infección iatrogénica. algunas soluciones oftálmicas comunes como la proparacaina cambian de color, eso indica oxidación.

Técnicas de instilación:

1. Con el paciente mirando hacia abajo y en el párpado superior retractado, será colocada la solución a la conjuntiva bulbar expuesta.

2.  Con la cabeza del paciente inclinada hacia atrás, para que el eje visual esté lo mas vertical posible, el parpado inferior se retracte y el parpado inferior se estabilice.

Después de que los parpados este cerrados, el paciente debe de evitar presionarlos. La presión será aplicada con la yema de los dedos sobre la punca y canalículos para minimizar el drenaje naso lagrimal.

El mismo efecto máximo del fármaco se puede conseguir con muchos fármacos hipotensores oculares a concentraciones más bajas y las frecuencias de dosificación más bajos que los que generalmente recomendada.

La colocación simple de gotas en las pestañas de los párpados cerrados también se ha demostrado que logran un midriasis y cicloplejia eficaz en la población pediátrica.

Dispensario de uni-dosis.

Reconociendo que la terapia de largo plazo con utilizada frecuencia puede ser toxico para la superficie ocular, los  manufactudores han formulado algunas soluciones oftalmicas en una sola dosis sin conservantes.

Procedimiento recomendado para la instalación de las soluciones oculares tópicos

1. inclinación de la cabeza del paciente hacia atrás.

2. Enseñar al paciente a dirigir la mirada hacia el techo.

3. agarre suavemente el párpado inferior externo abajo las pestañas y tire del párpado lejos del globo ocular.

4. Sin tocar las pestañas o párpados, todavía una gota de solución en el saco conjuntival.

5. continuar manteniendo los párpados en esta posición durante unos segundos para permitir que la solución a gravite en la parte más profunda en el fondo de saco inferior.

6.  Mostrar al paciente a mirar hacia abajo mientras levanta el párpado hacia arriba hasta que toque el globo.

7.  Intruir al paciente que cierre los ojos delicadamente.

8. Delicadamente cierre los ojos por 2 a 3 minutos.



Unguentos:
Los ungüentos también se utilizan con frecuencia para la aplicación al ojo. cuando se aplica al saco conjuntival inferior, pomadas oftálmicas se funden rápidamente, y el exceso se extiende hacia fuera sobre los bordes de los párpados, las pestañas, y la piel de los párpados. dependiendo de la cantidad infundido y de la extensión de lagrimeo inducida por cualquier irritación
técnicas de aplicación:
los pacientes son instruidos para elevar la mirada, y con el párpado inferior se retractó, el ungüento se inculca en el saco conjuntival inferior. un parche de presión puede entonces aplicarse.
para el uso de acostarse, por lo menos 1 cm de ungüento se aplica generalmente.
un método alternativo de aplicación consiste en colocar la pomada en un aplicador con punta de algodón y aplicarlo a la margen del párpado superior y las pestañas, así como los cantos medial y lateral. De esta manera, visión borrosa e irritación de drogas se reducen al mínimo. Además, la pomada actúa como un depósito de medicamento y tiene un efecto terapéutico durante aproximadamente 6 horas.
Una vez que los ungüentos se ha inculcado, la biodisponibilidad de soluciones posteriormente inculcados puede ser alterada de la superficie ocular. cuando se utilizan ambas formulaciones en solución y el ungüento en la terapia, la solución debe ser inculcado antes de aplicar la pomada
.

Complicaciones:
dermatitis de contacto de los párpados a veces ocurre durante el uso de pomadas que contienen agentes sensibilizantes como la atropina o neomicina, porque ungüentos se caracterizan por el tiempo de contacto ocular prolongado. También puede ocurrir hipersensibilidad a los conservantes incorporados.

Lentes oftalmicas de hidrogel, se caracterizan por una cinética de primer orden, por lo que sólo de vez en cuando ofrecen ninguna ventaja significativa sobre las soluciones o pomadas aplicadas tropical.

El colágeno Escudos

Con la forma de las lentes de contacto, escudos de colágeno son delgadas membranas de colágeno porcino o bovino que se ajusten a la córnea cuando se coloca en el ojo. Se envasan en un estado deshidratado y requieren de rehidratación antes de la aplicación. Cuando un escudo se rehidrata en una solución que contiene un fármaco soluble en agua, el fármaco queda atrapado en la matriz de colágeno. Escudos de colágeno han sido ampliamente estudiados por su utilidad potencial como dispositivos de administración de fármacos debido a que el fármaco se libera como se disuelve el escudo. Ellos han sido evaluados para la entrega de antibacteriano, anti fúngico, antiviral, antiinflamatorio, y fármacos inmunosupresores, así como anticoagulantes. Colágenos disponibles tienen velocidades de disolución variables de 12, 24 ó 72 horas, dependiendo de la cantidad de colágeno recirculación inducida por la radiación ultravioleta durante el proceso de fabricación. Su permeabilidad al oxígeno es comparable con la de una lente de metacrilato de hidroxietilo del contenido de agua similar. Antes de la inserción, los escudos deben ser rehidratados durante al menos 3 minutos en solución salina, solución de lubricantes, antibiótico, o esteroides. Debido a que los escudos pueden ser incómodos cuando primero se coloca sobre la córnea, puede ser necesario el uso de un anestésico tópico.

Filtra tiras de papel

Hay tinción con fluoresceína agentes en sodio, lisa mina, verde y rosa de bengala-están disponibles comercialmente como tiras de papel de filtro impregnado de drogas. La administración del fármaco permite que estos agentes pueden administrar más fácilmente a la vista en cantidades de dosificación adecuadas para su propósito clínico previsto.Tenga en cuenta sin embargo, que la concentración de rosa de Bengala entregado a la superficie ocular puede ser relativamente baja y depende de la tira de tiempo de inmersión y la técnica.La disponibilidad de tiras de papel impregnado con fluoresceína elimina el riesgo de contaminación de la solución con.Para administración la tira de papel impregnado de drogas se humedece con una gota de solución salina normal o solución de irrigación intraocular y el aplicador se toca suavemente a la conjuntiva bulbar superior o inferior o en el saco conjuntival inferior. Para evitar el riesgo de contaminación croos- entre los ojos los profesionales deben utilizar aplicadores separados para la entrega de tinte a los ojos un poco con sospecha de infección.

Los parches de algodón

Compresas de algodón saturado con soluciones oftálmicas pueden ser de valor en varias situaciones clínicas. Estos dispositivos permiten que el tiempo de contacto ocular prolongado con soluciones que son normalmente tropical en el ojo. Una compresa se construye simplemente burlas la punta de un aplicador de algodón para formar una pequeña (aproximadamente 5 mm) de cuerpo alargada del algodón. Después de colocar uno o dos gotas de la solución oftálmica en la compresa, el dispositivo se coloca en el fondo de saco conjuntival.

Dispositivos de flujo continuo

Cuando se requieren cantidades relativamente pequeñas de medicamento para administración al ojo, el uso de soluciones, ungüentos, o geles es generalmente satisfactoria. Sin embargo, cuando se requieren grandes volúmenes de fluidos, tales como en el tratamiento de quemaduras químicas agudas, otros sistemas de administración de fármacos son necesarios. Han desarrollado varios métodos para la entrega de grandes volúmenes de fluidos continuamente a la vista.

Sistemas de riegos convencionales

Riego intraocular se utiliza a menudo en el tratamiento inicial de ocular organismos o quemaduras químicas extranjeras en un esfuerzo para desalojar el material extraño. También se utiliza para eliminar el fármaco excesivo del ojo después de la tinción con fluoresceína o rosa de bengala o después de procedimientos giroscópicas en genérale se han utilizado soluciones de lente de unión viscosa. El sistema de suministro convencional para fluidos de irrigación consiste simplemente en el contenedor de solución de irrigación y un medio, generalmente una toalla de tejido o emesis cuenca, con la que para recoger el fluido después de bañar el ojo.

                                                                                                                                               

Sistemas de riegos continuos

 La lente Morgan es el más conveniente sistema disponible comercialmente. Este sistema es capaz de suministrar un flujo continuo de solución salina os a cada superficie del ojo y el saco conjuntival.

Administración peri ocular

Cuando se requieren mayores concentraciones de drogas, en particular de los corticosteroides y antibióticos, en el ojo bronceado puede ser entregado por la administración tópica, inyecciones locales en los tejidos peri oculares pueden ser consideradas. Administración de fármacos peri ocular incluye su conjuntival, retro bulbarperi bulbar administración.

La inyección su conjuntival

Aunque las aplicaciones tópicas repetidas de la mayoría de los medicamentos oculares resultan en niveles de fármaco intraoculares comparables con los obtenidos con inyecciones su conjuntivales, inyecciones su conjuntivales ofrecen una ventaja en la administración de fármacos, tales como antibióticos, con una penetración intraocular POR. Este modo de administración de fármacos ofrece las siguientes ventajas:

• Concentraciones locales altas de fármaco se pueden obtener con el uso de pequeñas cantidades de medicamento, por lo THT se evitan los efectos sistémicos adversos.

• Elevadas concentraciones en tejido pueden obtener con medicamentos que mal penetrar la capa epitelial de la corneo r conjuntiva. Este método es útil en pacientes que utilizan 2 fiable medicación tópica.

• Los medicamentos se pueden inyectar en la conclusión de la cirugía para evitar la necesidad de la terapia con medicamentos tópicos o sistémicos. Inyección su conjuntival consiste en pasar  entre la conjuntiva anterior cápsula. Esto se puede realizar a través del párpado o directamente en el espacio su conjuntival.

Inyección Sub-tenon's

Anterior inyección sub-Tenon's no ofrece ventajas significativas sobre la administración del fármaco su conjuntival. De hecho, la inyección sub-Tenon's ofrece menores cantidades de fármaco para el ojo y se asocia con un mayor riesgo de perforar el globo. A pesar de estas desventajas, sin embargo, anterior inyecciones sub-Tenon's de corticosteroides son utiliza ocasiones  en la uveítis severa en tratamiento.

InyecciónRetro bulbar

Fármacos se han administrado por inyección retro bulbares desde el 1920. El procedimiento fue desarrollado originalmente para anestesiar el mundo para la extracción de cataratas y otras cirugías intraoculares, y esto sigue siendo que el uso clínico director. Sin embargo, también se han administrado los antibióticos, los vasodilatadores, los corticosteroides y alcohol esta ruta. Actualmente, los anestésicos retro bulbares son frecuentemente (aunque su Bulbares clínica sigue siendo controvertido y no probada), y retrobulbar de alcohol o fenol es raramente administrada para el dolor acular intratable en blinde sí. Aunque la anestesia retrobulbar ha sido rutinariamente para usos sugerí catarata, muchos cirujanos se NPW utilizan anestésicos tópicos para la mayoría de los contemporáneos extracciones de cataratas.

Administración intravítrea

Muchos medicamentos han sido inyectados directamente en el humor vítreo. Estos incluyen agentes antibacterianos y anti fúngicos para el tratamiento de en oftalmitis bacteriana y fúngica, respectivamente, y los antivirales para el tratamiento de la retinitis viral. El tratamiento de muchas enfermedades intraoculares usando fármacos administrados sistémicamente se ve obstaculizada de la penetración del fármaco Por en el ojo. Los complejos de unión apretados del epitelio pigmentario de la retina y capilares de la retina sirven como la barrera sangre-ocular, que inhibe la penetración de los antibióticos en el humor vítreo. Los pacientes con en oftalmitis pueden ser tratados con éxito utilizando en lugar tan antibióticos administrados por vía sistémica intravítreas y subconjuntivales. Aunque antibióticos sistémicos se utilizan a menudo para tratar la en oftalmitis bacteriana, la ruta de administración sistémica tiene una eficacia limitada, así como los posibles efectos secundarios que limitan el éxito terapéutico.

TERAPIA FOTODINÁMICA

La neo vascularización coroidea asociada con la degeneración macular relacionada con la edad es difícil de tratar con los procedimientos con láser convencionales porque los tejidos normales de la retina pueden ser destruidos, lo que resulta en la pérdida de la visión central. La terapia fotodinámica ofrece la oportunidad de erradicar selectivamente las membranas neo vasculares mientras que produce un daño mínimo a los tejidos de la retina y las coroides normales.

El procedimiento implica la administración intravenosa de verteporfina (Visudyne) durante 10 minutos. La verteporfina es un colorante foto sensibilizador potente. Cinco minutos después de la conclusión de la administración del colorante, tiempo durante el cual el fármaco se acumula selectivamente en el tejido neo vascular, la luz no térmica a 689 nm se aplica a la anormal durante 83 segundos. Cuando se activa por la luz, hace que la verteporfina la producción de radicales de oxígeno  y libres que producen la muerte celular y la oclusión de los vasos anormales.

La terapia fotodinámica parece ser un procedimiento seguro. Complicaciones poco frecuentes incluyen reacciones en el lugar de la inyección, la reducción transitoria de la visión y la foto sensibilidad que duran menos de 24 horas. No se han reportado interacciones entre verteporfina y otros medicamentos.

El uso de  en la terapia fotodinámica de la degeneración macular neo vascular relacionada con la edad se ha demostrado ser eficaz en la estabilización  Aunque retratamientos Generalmente se necesitan para recurrentes  buque, esta modalidad terapéutica ha demostrado ser un tratamiento importante para pacientes con la forma neo vascular de la degeneración macular relacionada con la edad. También ha demostrado ser beneficiosa en el tratamiento de la neo vascularización coroidea no asociada con la degeneración macular relacionada con la edad, tales como la miopía patológica, la histoplasmosis ocular, estrías  y debido a causas idiopáticas.

Tecnicas de tinción.

Técnicas de tinción. Fundamentos

El tamaño de la mayoría de las células bacterianas es tal que resultan difíciles de ver con el microscopio óptico. La principal dificultad es la falta de contraste entre la célula y el medio que la rodea, y el medio más simple de aumentar el contraste es la utilización de colorantes. Estos pueden emplearse para distinguir entre tipos diferentes de células o para revelar la presencia de determinados constituyentes celulares, tales como flagelos, esporas, cápsulas, paredes celulares, centros de actividad respiratoria, etc.

Las células generalmente son tratadas para coagular el protoplasma antes de teñirlas, proceso llamado fijación. Para bacterias, la fijación por el calor es lo más corriente, aunque también puede fijarse con sustancias químicas como formaldehido, ácidos y alcoholes. Después de la fijación, si se añade el colorante, no se producen ulteriores cambios estruturales en el protoplasma. La fijación se realiza habitualmente en células que han sido fijadas sobre un portaobjetos, tratando después éste con el agente fijador, y siguiendo inmediatamente el proceso de tinción. La fijación produce habitualmente el encogimiento de las células; la tinción, por el contrario, hace que las células aparezcan mayores que lo que son realmente, de manera que las medidas de las células que han sido fijadas o teñidas no pueden realizarse con mucha precisión.

La mayoría de los colorantes son compuestos orgánicos que tienen alguna afinidad específica por los materiales celulares. Muchos colorantes utilizados con frecuencia son moléculas cargadas positivamente (cationes) y se combinan con intensidad con los constituyentes celulares cargados negativamente, tales como los ácidos nucleicos y los polisacáridos ácidos. Ejemplos de colorantes catiónicos son el azul de metileno, el cristal violeta y la safranina. Otros colorantes son moléculas cargadas negativameute (aniones) y se combinan con los constituyentes celulares cargados positivamente, tales como muchas proteínas. Esos colorantes incluyen la eosina, la fucsina ácida y el rojo Congo. Otro grupo de colorantes son sustancias liposolubles; los colorantes de este grupo se combinan con los materiales lipídicos de la célula, usándose a menudo para revelar la localización de las gotículas o depósítos de grasa. Un ejemplo de colorante liposoluble es el negro Sudán.

Algunos colorantes teñirán mejor sólo después de que la célula haya sido tratada con otra sustancia química, que no es un colorante por sí mismo. Esta sustancia se denomina mordiente; un mordiente habitual es el ácido tánìco. El mordiente se combina con un constituyente celular y lo altera de tal modo que ahora sí podrá atacar el colorante.

Si se desea simplemente incrementar el contraste de las células para la microscopía, son suficientes los procedimientos simples de tinción. El azul de metileno es un buen colorante simple que actúa sobre todas las células bacterianas rápidamente y que no produce un color tan intenso que oscurezca los detalles celulares. Es especialmente útil para detectar la presencia de bacterias en muestras naturales, puesto que la mayor parte del material no celular no se tiñe.

La tinción negativa es el reverso del procedimiento de tinción usual: las células se dejan sin teñir, pero se colorea en cambio el medio que las rodea. Lo que se ve, por tanto, es el perfil de las células. La sustancia utilizada para la tinción negativa es un material opaco que no tiene afinidad por los constituyentes celulares y que simplemente rodea las células, tal como la tinta china (que es una suspensión de particulas de carbono coloidal) o la nigrosina (un colorante negro insoluble en agua). La tinción negativa es un modo satisfactorio de aumentar el contraste de las células en la microscopia óptica, pero su máxima utilidad está en revelar la presencia de cápsulas alrededor de las células bacterianas.

Los métodos de tinción son de gran utilidad, pero deben usarse siempre con precaución, ya que pueden conducir a errores. Las moléculas de colorante forman en ocasiones precipitados o agregados que parecen estructuras celulares auténticas, pero que son formaciones completamente artificiales inducidas por el mismo colorante. Tales estructuras se denominan artefactos, y deben tomarse muchas precauciones para tener la seguridad de que no nos estamos equivocando al creer que un artefacto es una estructura realmente existente.

Preparación de un frotis

Sobre un portaobjetos de vidrio, limpio y seco, se coloca una gota del material que se va a teñir (si es líquido) o se hace rodar el hisopo con que se tomó la muestra. Una vez que el hisopo ha tocado la superficie del portaobjetos, que no está estéril, ya no puede ser empleado para inocular los medios de cultivo. Puede usarse una aguja estéril para transferir una pequeña cantidad de un cultivo bacteriano a la superficie del portaobjetos. Este material es suspendido en una gota de agua o solución salina previamente colocada sobre el portaobjetos. Cuando se trata de colonias muy pequeñas que pueden perderse en una gota de líquido se emplea una varilla delgada de madera estéril con la cual se toca la colonia obteniéndose así una fracción apreciable del desarrollo. El material se frota directamente sobre el portaobjetos, donde puede visualizarse con facilidad. El material colocado en el portaobjetos se deja secar al aire o bien se pasa varias veces por la zona azul de la llama de un mechero de Bunsen hasta que el vidrio esté tan caliente que moleste al tacto pero no queme.

Examen de muestras al microscopio

Según la manipulación que efectuemos sobre la muestra a observar y según los colorantes que empleemos durante el proceso, podemos hablar de diferentes modalidades de tinción.

Examen microscópico directo de las muestras clínicasSin Tinción

No se utiliza ningún tipo de colorante.

Es el montaje directo húmedo o examen en fresco: las muestras se extienden directamente sobre la superficie de un portaobjetos para su observación. El material que es demasiado espeso para permitir la diferenciación de sus elementos puede diluirse con igual volumen de solución salina fisiológica estéril. Se deposita suavemente un cubreobjetos sobre la superficie del material.

Este tipo de preparación se emplea para detectar trofozoítos móviles de parásitos intestinales como Giardia, Entamoeba, huevos y quistes de otros parásitos, larvas y gusanos adultos,Trichomonas, hifas de hongos, etc

En la imagen: Candida sp en un examen en fresco.

Examen microscópico de las muestras clínicas levemente modificadasTinción Simple

Se utiliza un solo colorante, por lo que todas las estructuras celulares se tiñen con la misma tonalidad (Tinta china, Azul Metileno de Loeffler, Azul de lactofenol).

El Hidróxido de potasio al 10% (solución de KOH) permite ver elementos de hongos ya que el KOH digiere parcialmente los componentes proteicos, por ejemplo de la célula huésped, pero no actúa sobre los polisacáridos de las paredes celulares de los hongos.

La tinta china o Nigrosina permite observar células levaduriformes capsuladas (Cryptococcus), sobre todo en LCR. Los polisacáridos capsulares rechazan la tinta china y la cápsula aparece como un halo claro alrededor de los microorganismos. Azul de metileno de Loeffler puede agregarse a las preparaciones en fresco de heces para observar la presencia de leucocitos.

En la imagen: Cryptococcus neoformans en una tinción con tinta china.

Examen microscópico de las muestras clínicas muy modificadasTinción Diferencial

Se utilizan varios colorantes combinados. Las estructuras celulares se diferencian en función de los diferentes colorantes que fijan de acuerdo con su propia constitución química.

Los ejemplos clásicos sería la tinción de GRAM o la de Ziehl-Neelsen

En la imagen: BGN y levaduras en una tinción GRAM

microfotografía: Daniel Val

Examen de muestras al microscopio: la tinción GRAM

La tinción de Gram es uno de los métodos de tinción más importantes en el laboratorio bacteriológico y con el que el estudiante debe estar perfectamente familiarizado. Su utilidad práctica es indiscutible y en el trabajo microscópico de rutina del Laboratorio de Microbiología las referencias a la morfología celular bacteriana (cocos, bacilos, positivos, negativos, etc) se basan justamente en la tinción de GRAM

Descripta en forma breve, la secuencia de la tinción es la siguiente: el Frotis fijado con calor se tiñe 1 min con Violeta Cristal, se lava con agua, se cubre con solución Yodada durante 1 min y se lava de nuevo con agua, decolorar con mezcla alcohol etílico/acetona. Escurrir y cubrir con Safranina (color de contraste) durante 20 seg. Lavar y secar.

Esta tinción se denominada así por el bacteriólogo danés Christian Gram, quien la desarrolló en 1844. Sobre la base de su reacción a la tinción de Gram, las bacterias pueden dividirse en dos grupos, grampositivas y gramnegativas (en este caso, los términos positivo y negativo no tiene nada que ver con carga eléctrico, sino simplemente designan dos grupos morfologicos distintos de bacterias).

Las bacterias gram-positivas y gram-negativas tiñen de forma distinta debido a las diferencias constitutivas en la estructura de sus paredes celulares. La pared de la célula bacteriana sirve para dar su tamaño y forma al organismo así como para prevenir la lisis osmótica. El material de la pared celular bacteriana que confiere rigidez es el peptidoglicano. La pared de la célula gram-positiva es gruesa y consiste en varias capas interconectandas de peptidoglicano así como algo de ácido teicoico. Generalmente, 80%-90% de la pared de la célula gram-positiva es peptidoglicano. La pared de la célula gram-negativa, por otro lado, contiene una capa mucho más delgada, únicamente de peptidoglicano y está rodeada por una membrana exterior compuesta de fosfolípidos, lipopolisacáridos, y lipoproteínas. Sólo 10% - 20% de la pared de la célula gram-negativa es peptidoglicano.

Debido a su importancia en taxonomía bacteriana y a que indica diferencias fundamentales de la pared celular de las distintas bacterias, describiremos aquí con algún detalle la tinción de Gram y las interpretaciones que actualmente se hacen sobre el porqué de su funcionamiento.

Las células fijadas al calor sobre un portaobjetos se tiñen, primero con una solución de cristal violeta (otros colorantes básicos no son tan efectivos) y son lavadas después para quitar el exceso de colorante. En este estado, todas las células, tanto las grampositivas como las gramnegativas, están teñidas de azul.

El portaobjetos se cubre entonces con una solución de yodo-yoduro potásico. El ingrediente activo es aquí el I2; el KI simplemente hace soluble el I2 en agua. El I2 entra en las células y forma un complejo insoluble en agua con el cristal violeta. De nuevo tanto las células grampositivas como las gramnegativas se encuentran en la misma situación.

Se lleva a cabo después la decoloración, usando una mezcla de alcohol-acetona, sustancias en las que es soluble el complejo I2-cristal violeta. Algunos organismos (grampositivos) no se decoloran, mientras que otros (gramnegativos) lo hacen. La diferencia esencial entre esos dos tipos de células está por tanto en su resistencia a la decoloración; esta resistencia se debe probablemente al hecho de que en el caso de bacterias gram-negativas, la mezcla de alcohol/acetona es un solvente lipídico y disuelve la membrana exterior de la pared de la célula (y también puede dañar la membrana citoplásmica a la que se une peptidoglicano). La delgada capa de peptidoglicano es incapaz de retener el de complejo cristal violeta-yodo y la célula se decolora. Las células grampositivas, a causa de sus paredes celulares más espesas (tienen más peptidoglicano y menos lípido), no son permeables al disolvente ya que éste deshidrata la pared celular y cierra los poros, disminuyendo así el espacio entre las moléculas y provocando que el de complejo cristal violeta-yodo quede atrapado dentro de la pared celular. Después de la decoloración las células grampositivas son todavía azules, pero las gramnegativas son incoloras.

Para poner de manifiesto las células gramnegativas se utiliza una coloración de contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina básica. Después de la coloración de contraste las células gramnegativas son rojas, mientras que las grampositivas permanecen azules.

Deben destacarse algunos aspectos cruciales de la tinción de Gram:

1) El tratamiento con cristal violeta debe preceder al tratamiento con yodo. El yodo por sí solo tiene poca afinidad con las células.

2) La decoloración debe realizarse con poca agua para evitar que pierdan la tinción las células grampositivas. EI proceso de decoloración debe ser corto y es esencial un cálculo preciso del tiempo para obtener resultados satisfactorios.

3) Cultivos más viejo de 24 horas pueden perder su habilidad de retener el complejo cristal violeta - yodo.

El carácter de grampositivo no es siempre un fenómeno del todo o nada. Algunos organismos son más grampositivos que otros y algunos son gram-variables, es decir, unas veces grampositivos y otras gramnegativos.

Morfología ultramicroscópica de las bacterias: estructuras internas

Pared celular

Debajo de las sustancias extracelulares, como son las cápsulas y cubiertas mucilaginosas, y en la periferia de una delicada membrana que está en inmediato contacto con el citoplasma, se encuentra la pared celular, que es una estructura rígida que da forma a la célula. Las paredes celulares pueden destruirse o romperse en condiciones especiales.

Constituyentes importantes de la pared celular son los aminoácidos, aminoazúcares, azúcares y grasas. Estas sustancias (proteínas, Hidratos de carbono, grasas) están enlazadas formando el polímero complejo que forma la pared celular.

Entre los constituyentes de la pared celular de las bacterias Gram-positivas y Gram-negativas existen importantes diferencias. Por ejemplo, las paredes de las bacterias gram-positivas contienen menos aminoácidos que las gram-negativas; el contenido graso es mucho más elevado en las gram-negativas que en las gram-positivas. Este hecho se ha propuesto como explicación del mecanismo de la reacción al gram (ver las dos imágenes juntas).

Bacteria Gram Positiva	Bacteria Gram Negativa
Tiene una capa gruesa de peptidoglicano (mureina) y dos clases de ácidos teicoicos. Ácido Lipoteicoico que está en la superficie, empotrado en la capa de peptidoglicano y unido a la membrana citoplásmica. Y ácido teicoico de la pared que está en la superficie y se une sólo a la capa de peptidoglicano. El ácido Teicoico es el responsable del determinante antigénico del organismo.	Tiene una capa delgada de peptidoglicano (mureina) unida a una membrana exterior por lipoproteínas. La membrana exterior está hecha de proteína, fosfolípido y lipopolisacárido. En el lipopolisacárido, la porción de lípido está embebida en el fosfolípido y el antígeno O polisacárido está en la superficie. El lípido se llama Lípido A y es tóxico, pero el lipopolisacárido entero se llama Endotoxina. La pared de la célula tiene poros llamado Porines para el transporte de substancias de peso molecular bajo. Entre la membrana citoplásmica y la pared celular hay un espacio periplásmico con enzimas hidrolíticas, enzimas inactivadoras de antibióticos y proteínas de transporte.

CÉLULAS PROCARIOTAS Y EUCARIOTAS

Diferencias entre células

Célula procariota y célula eucariota La célula procariota no tiene núcleo protector del material genético. La célula eucariota sí presenta núcleo. El citoplasma de la célula eucariota se encuentra compartimentado, mientras que en la procariota no aparece esta compartimentación. Las células procariotas son organismos más primitivos que las células eucariotas. El ADN de células procariotas es circular, mientras que el ADN de eucariotas es lineal.

PDF Células procariotas y eucariotas